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人鈣網蛋白(CRT)ELISA試劑盒

簡要描述:

實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被目標物抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標物呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

更新時間:2024-09-07

人鈣網蛋白(CRT)ELISA試劑盒

 

ELISA試劑盒中文指南

實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被目標物抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標物呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
 
樣本處理及要求
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于2000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8℃ 2000g離心30分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融
3. 細胞培養物上清或其它生物標本:2000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
Elisa Biotech生產的各項指標ELISA試劑盒的檢測范圍適中。經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,因此,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
 
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
 
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
12孔×8條
12孔×4條
標準品
0.5mL*6管
0.5mL*6管
按說明書復溶
樣本稀釋液
10mL
10mL
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書稀釋
底物A
6mL
3mL
底物B
6mL
3mL
終止液
6mL
3mL
封板膜
2張
2張
說明書
1份
1份
自封袋
1個
1個
 
注意事項
1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置
 
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
1. 標準品復溶:試劑盒提供6管標準品,每管已標定濃度,并且凍干。實驗前在每個標準品管中加入0.5mL樣本稀釋液,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動助其溶解,使其恢復為每個標準品管身標注的濃度。
2. 2洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
 
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4-5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度

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