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人腫瘤壞死因子α高敏 ELISA 試劑盒檢測前準備工作

更新時間:2020-06-16   點擊次數:1147次
   人腫瘤壞死因子α高敏 ELISA 試劑盒檢測前準備工作:
  1、請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
  2、將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結 晶,屬于正常現象,可用40℃水浴微加熱使結晶*溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超 過50℃,使用時洗滌液應為室溫)。當日使用。
  1、使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
  2、標準品(凍干品):每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為1000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管,每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液,依次倍比稀釋成不同的梯度,標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。人腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
  4、生物素化抗體工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配 制100-200μL。使用前15分鐘,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作 濃度。當日使用。
  5、酶結合物工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制 100-200μL。使用前15分鐘,以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。 當日使用。
  人腫瘤壞死因子α高敏 ELISA 試劑盒操作程序:
  1、棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。
  2、每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.。
  3、取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  4、測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
  5、根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。