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大鼠種植性CBRH-7919肝癌模型的MRI、數(shù)字減影血管造影及病理學(xué)表現(xiàn)

更新時(shí)間:2013-02-23   點(diǎn)擊次數(shù):3055次

 

上海義森生科技有限公司
Abstract
BACKGROUND: Rat implanted CBRH-7919 hepatic cancer models are important tools for the experimental therapy and
imageologic diagnosis. However, how to determine and verify the established models remains poorly understood.
OBJECTIVE: To study the imageologic and pathologic findings of implanted CBRH-7919 hepatic cancer model in Wistar rats.
METHODS: Concentrated cancerous suspension of CBRH-7919 cell lines were injected subcutaneouly into the nude mice
scapular region. Then the tumor tissues were implanted into the liver of adult Wistar rats under direct vision. At 4 weeks after
implantation, models were confirmed by color ultrasonograph and observed by imageologic and pathologic examination.
RESULTS AND CONCLUSION: Totally 37 nodes were found by ultrasonograph in 35 successful models, and additional 4 nodes
were found by magnetic resonance imaging (MRI), with the diameter of the largest tumor was 8 mm, and the least was 3 mm. The
tumor presented with hypointensity signal on T1WI and hyperintensity signal on T2WI and fat-suppression images. Digital
subtraction angiography showed that all nodes had a large amount of blood supply which came from the liver arteries. The tumor
cells are variable in sizes and shapes, disarranged and remarkable atypia with light microscopic observation. All findings
demonstrated that, color ultrasonograph and MRI are effective and convenient to examine the model rats, but digital subtraction
angiography can help us to find the blood supply of tumors. MRI and digital subtraction angiography examination can show
pathological and biological behavior changes of tumor in rat implanted hepatic cancer models.
Shen JJ, Li HP, Yang JY, Zhang B, Hou CL. Magnetic resonance imaging, digital subtraction angiography and pathologic findings
of rat implanted CBRH-7919 hepatic cancer models. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(2):
摘要
背景:大鼠種植性CBRH-7919肝癌模型是肝癌實(shí)驗(yàn)性治療和影像學(xué)診斷研究重要的工具,但模型建立后如何對模型進(jìn)行檢
測和驗(yàn)證鮮有報(bào)道。
目的:通過彩色超聲、MRI 及肝動脈血管數(shù)字減影血管造影檢查的方法來檢測和驗(yàn)證Wistar 大鼠種植性CBRH-7919 肝癌
模型,并探討大鼠種植性CBRH-7919肝癌模型的影像學(xué)及病理表現(xiàn)。
方法:CBRH-7919大鼠肝癌細(xì)胞瘤株接種裸鼠雙側(cè)肩胛部皮下,再將生成的腫瘤組織在開腹直視下移植接種于成年Wistar
大鼠肝臟內(nèi),建立大鼠種植性CBRH-7919 肝癌模型。模型建立4 周后用彩超檢查、篩選建模成功的Wistar 大鼠進(jìn)行MRI
檢查、肝動脈血管數(shù)字減影血管造影及病理學(xué)檢查。
結(jié)果與結(jié)論:在建模成功的35只大鼠中,超聲檢查發(fā)現(xiàn)37個(gè)結(jié)節(jié),MRI檢查發(fā)現(xiàn)肝臟內(nèi)共41個(gè)結(jié)節(jié),較超聲增加4個(gè);
zui小的結(jié)節(jié)約3 mm,zui大約8 mmMRI掃描顯示T1WI表現(xiàn)為低信號,T2WI及脂肪抑制序列表現(xiàn)高信號。肝動脈血管數(shù)
字減影血管造影均表現(xiàn)由肝動脈供血的富血供結(jié)節(jié)。光學(xué)顯微鏡下觀察可見腫瘤細(xì)胞呈巢狀或條塊狀排列,周圍伴行多條血
管,腫瘤細(xì)胞體積大小不一致,核大而濃染,細(xì)胞質(zhì)少,異型性明顯。結(jié)果表明彩超和核磁共振掃描是大鼠肝癌檢查簡單而
有效的方法,肝動脈血管數(shù)字減影血管造影可以了解腫塊的供血動脈及其血供情況。通過對Wistar 大鼠種植性肝癌模型的
MRI及肝動脈血管數(shù)字減影血管造影表現(xiàn)能反映腫瘤的病理形態(tài)學(xué)和生物學(xué)行為改變。
關(guān)鍵詞:數(shù)字減影血管造影;Wistar大鼠;肝腫瘤;動物模型;MRI;病理學(xué)
0 引言
大鼠種植性CBRH-7919 肝癌模型是肝癌
實(shí)驗(yàn)性治療和影像學(xué)診斷研究重要的工具[1-2]
人類原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular
carcinoma, HCC)具有*的發(fā)病率和腫瘤相
關(guān)死亡率[3-6],在過去幾十年里HCC 發(fā)病率持
續(xù)升高,現(xiàn)為世界上*5 位的常見惡性腫
[7]。建立一個(gè)合適的動物肝癌模型對于探索
人類肝癌治療新方法有很大的價(jià)值[8]。國內(nèi)張
火俊等[9]B超引導(dǎo)下,成功地建立了SD
鼠的Walker-256 腫瘤細(xì)胞的肝癌模型。但模
型建立后如何去檢測和驗(yàn)證至關(guān)重要。
本實(shí)驗(yàn)擬建立大鼠種植性 CBRH-7919
癌模型,然后通過聯(lián)合彩色超聲、MRI 及肝動
脈血管數(shù)字減影血管造影(digital subtraction
angiographyDSA)檢查的方法來發(fā)現(xiàn)、檢測
和驗(yàn)證模型,并對腫瘤模型進(jìn)行影像學(xué)及病理
學(xué)檢測,進(jìn)一步了解腫瘤組織生物學(xué)行為。
沈俊杰,等.大鼠種植性CBRH-7919肝癌模型的MRI、數(shù)字減影血管造影及病理學(xué)表現(xiàn)
ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH 225
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1 材料和方法
設(shè)計(jì):動物模型建立影像學(xué)檢測實(shí)驗(yàn)。
時(shí)間及地點(diǎn):2009-09/2010-06 在中
山大學(xué)附屬*醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室完成。
材料:50 d 左右裸鼠10 只,BALB/
c-nu/nu,清潔級,雌雄不限,體質(zhì)量30~40 g
室內(nèi)溫度26~28 40%~60%,供瘤
株傳代用;清潔級Wistar 大鼠42 只,雌雄不
限,體質(zhì)量180~220 g,供接種腫瘤用。均購
自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心,許可證號SCXK
)20090011。實(shí)驗(yàn)過程中對動物處置符合
2006 年科學(xué)技術(shù)部發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動
物的指導(dǎo)性意見》[10]CBRH-7919 腫瘤細(xì)胞
由中山大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心細(xì)胞室提供。
主要試劑及儀器:
試劑及儀器 來源
DMEM,體積分?jǐn)?shù)
10%FBS
彩超TOSHIBA Nemio
XG SSA-580A
Philips 1.5T
Simens 3.0T
光學(xué)顯微鏡
上海義森生物科技有限公司
日本東芝公司中國公司,北京
飛利浦中國有限公司,北京
西門子公司中國分公司,北京
重慶奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司
實(shí)驗(yàn)方法
大鼠種植性CBRH-7919 肝癌模型的建立和檢
測:1 mL 約含1×106個(gè)CBRH-7919 腫瘤
細(xì)胞的濃縮液分別注入裸鼠雙側(cè)肩胛部皮下,
每側(cè)注射0.5 mL。再將其放回飼養(yǎng)箱中飼養(yǎng),
10~14 d 后,裸鼠皮下均長出1 cm×2 cm大小
的腫塊,用體積分?jǐn)?shù)10%水合氯醛1.0~1.5 mL
腹腔注射法處死裸鼠,取出腫瘤組織,浸泡于
無菌生理鹽水中備用。
模型制備前將腫瘤組織剪成 0.5~1.0 mm3
大小的組織碎塊,用12G針頭及1 mL 注射器,
在開腹直視下向Wistar大鼠肝臟左葉內(nèi)接種上
述活組織碎塊,手術(shù)后4 周,用彩超篩選
出模型大鼠,再對超聲篩選的大鼠模型進(jìn)
核磁共振檢查,確定成功的模型,進(jìn)行大鼠
肝動脈DSA 血管造影檢查,并行病理學(xué)檢查。
實(shí)體腫瘤大小的測量對于實(shí)體腫瘤大小的
測量參照臨床常用的前國腫瘤界用的
標(biāo)準(zhǔn)RECIST[11]。其中測量方法James
[12]1999 年提出了腫瘤zui的長度代
替面積來代腫瘤大小的一測量法或稱單
測量法,可以簡化測量步、提高準(zhǔn)確性、
少誤差
MRI 檢查:MRI 檢查Philips 1.5T
Simens 3.0T 超導(dǎo)型核磁共振檢查用的
大鼠實(shí)驗(yàn)腹部線圈,用FSE序列T1WIT2WI
T2 脂肪抑序列,部分大鼠加做DWI。具
數(shù)如下:用FSE 序列參數(shù)為TR 3 600~
5 000 msTE100 ms,行T2WI 掃描,用SE
序列參數(shù)為TR 400~500 msTE 15 ms,行
T1WI 掃描TR 2 000 msTE 80 ms,行T2-FS
掃描矩陣均為256×192FOV8.0~10.0 cm
層厚3.0~4.0 mm層間距1.0 mm,常規(guī)橫軸
掃描,病灶層面增加掃描冠狀或矢狀位。
肝動脈血管造影:肝動脈血管造影
Philips Allura Xper FD 平板DSA,用體積分?jǐn)?shù)
10%水合氯醛液腹腔注射麻醉(3 mL/kg),大
麻醉后開腹,分大鼠的腹動脈,暴露
鼠腹腔動脈,取腹腔動脈開上方0.5~
1.0 cm穿刺點(diǎn),用27G管針
穿刺,將管開置于腹腔動脈開內(nèi),
推碘海醇歐乃派克)1 mL5~7 /s
觀察腫塊的血管及情況
病理學(xué)檢查:用體積分?jǐn)?shù)10%水合氯醛
3.0~4.0 mL腹腔注射法將大鼠處死后取出肝臟
標(biāo)本,再用體積分?jǐn)?shù)10%固定,進(jìn)行常規(guī)
水、透明、浸包埋切片蘇木精-伊紅
色,學(xué)顯微鏡×200 觀察
主要觀察指標(biāo):Wistar 大鼠種植性
CBRH-7919 肝癌模型的MRI 檢查、肝動脈血
管造影及病理學(xué)現(xiàn)。
2 結(jié)果
2.1 實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量分析實(shí)驗(yàn)中 10 只裸鼠無
死亡,雙側(cè)肩胛部均長出0.5~1.5 cm大小的腫
塊;42 Wistar 大鼠中有2 只死亡,剩余
40 只中有35 只大鼠成功建立大鼠種植性
CBRH-7919 肝癌模型,長出41 個(gè)結(jié)節(jié)或
塊,成功率為83.3%(35/42)
2.2 影像學(xué)表現(xiàn)在建模成功的35只大鼠中,
超聲檢查發(fā)現(xiàn)37 個(gè)結(jié)節(jié)MRI 檢查發(fā)現(xiàn)肝臟內(nèi)
41 個(gè)結(jié)節(jié)超聲增加4 個(gè)。其中zui小的結(jié)
節(jié)3 mmzui大的結(jié)節(jié)8 mm結(jié)節(jié)呈圓形
分葉MRI 像上,T2WI
T2 脂肪抑序列腫塊號,強(qiáng)度不均
T1WI呈稍低信號;彩超像上,腫塊大
中山大學(xué)附屬第
一醫(yī)院放射介入
科,廣東省廣州市
510080
沈俊杰☆,男,
1971 年生,安徽
省巢湖市人,漢
族,中山大學(xué)在讀
博士,中級職稱,
主要從事影像診
斷與介入放射學(xué)
研究。
sjjlsx
通訊作者:李鶴
平,博士,副主任
醫(yī)師,中山大學(xué)附
屬*醫(yī)院放射
介入科,廣東省廣
州市 510080
jxgdhp@hotmail.
com
中圖分類號:R318
文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A
文章編號:1673-8225
(2011)02-00224-04
收稿日期:2010-07-12
修回日期:2010-08-18
(20100626014/ZW·Z)
沈俊杰,等.大鼠種植性CBRH-7919肝癌模型的MRI、數(shù)字減影血管造影及病理學(xué)表現(xiàn)
P.O. Box2261200, Shenyang 110004 cn.zglckf.com
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數(shù)呈高回聲,少數(shù)呈低回聲,見圖12
2.3 肝組織大體和病理表現(xiàn)
腫塊大體觀察:切面呈灰白色魚肉狀,無明顯壞死
或出血改變,與周圍正常肝組織分界較清晰,其中部
分大鼠肝臟及腹膜上多發(fā)小結(jié)節(jié)狀轉(zhuǎn)移灶,見圖3
病理學(xué)表現(xiàn):光學(xué)顯微鏡下可見腫瘤細(xì)胞呈巢狀或
條塊狀排列,周圍伴行多條血管,腫瘤細(xì)胞體積大小
不一致,核大而濃染,細(xì)胞質(zhì)少,異型性明顯,見圖4
2.4 肝臟腫瘤模型的肝動脈DSA 造影表現(xiàn)腫塊由
肝動脈分支供血,腫瘤血供豐富,染色明顯,見圖5
3 討論
CBRH-7919 大鼠肝癌細(xì)胞株來源于用二乙基亞
硝胺(DENA)誘發(fā)的Wistar 大鼠原發(fā)性肝癌,病理鑒定
為肝細(xì)胞性肝癌,細(xì)胞具有其起源的體內(nèi)肝癌細(xì)胞的
超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn),且可分泌甲胎蛋白,體外培養(yǎng)觀察,
細(xì)胞保持惡性類上皮細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn),單層細(xì)胞培養(yǎng)
可見細(xì)胞重疊堆積的生長現(xiàn)象,是很好的大鼠肝細(xì)胞
癌瘤株[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明來源于CBRH-7919 瘤株
Wistar 大鼠種植性CBRH-7919 肝癌模型的影像學(xué)
表現(xiàn)及生物學(xué)特點(diǎn)和人類的原發(fā)性肝癌較為相似。既
往報(bào)道移植性肝癌模型大多用Walker-256 瘤株制作
的,而Wistar 大鼠的CBRH-7919 肝癌模型報(bào)道較少。
Figure 1 Liver ultrasonogram of rat implanted hepatic cancer
models
1 大鼠移植性肝癌模型肝臟的超聲圖片
b: Hyperecho (arrow)
Figure 3 Liver specimen of rat implanted hepatic cancer
models
3 大鼠移植性肝癌模型肝臟標(biāo)本
a: Irregular tumors, sized 7.0 mm×8.0 mm
b: Granulous implanted metastatic lesions, sized 1.0-2.0 mm
Figure 4 Pathological examination of tumor tissues of rat
implanted hepatic cancer models
(Hematoxylin-eosin staining, ×200)
4 大鼠移植性肝癌模型肝臟腫瘤組織的病理學(xué)檢測
木精-伊紅染色,×200)
Figure 5 Digital subtraction angiography of rat implanted
hepatic cancer models
5 大鼠移植性肝癌模型的肝動脈DSA 造影
b: Staining of tumor
a: Hypoecho (arrow)
a: Artery of tumor
Figure 2 Color ultrasonograph of rat implanted hepatic
cancer models (Arrow: tumor)
2 大鼠移植性肝癌模型的彩超圖片
a: T1W1 b: T2-weight imaging c: Fat suppression
沈俊杰,等.大鼠種植性CBRH-7919肝癌模型的MRI、數(shù)字減影血管造影及病理學(xué)表現(xiàn)
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由于Walker-256 瘤株來自大鼠自發(fā)性乳腺癌,甲胎蛋
白陰性,故并不是真正意義上的肝細(xì)胞性肝癌模型。
國內(nèi)研究已經(jīng)證實(shí),將Walker-256 瘤株移植Wistar
SD大鼠肝臟后, 在瘤體直徑小于3 mm時(shí)主要由門
靜脈供血,直徑大于3 mm時(shí)主要由肝動脈供血[14-16]
本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示來源于CBRH-7919 瘤株的Wistar
大鼠的肝癌模型血供均為肝動脈供血,其血供特點(diǎn)和
生長行為與人類肝癌相似,因此該模型非常適用于肝
癌影像學(xué)研究及肝癌的介入治療和轉(zhuǎn)移等方面的研
究。
對于大鼠模型的肝臟內(nèi)腫塊的影像學(xué)檢查,建議
MRI 檢查,用專業(yè)的動物線圈,也可以用小
關(guān)節(jié)線圈代替。MRI 對于病灶信號的改變非常敏感,
可以不用增強(qiáng)就可以發(fā)現(xiàn)和準(zhǔn)確測量病灶,甚至可以
發(fā)現(xiàn)2.0~3.0 mm 病灶。超聲可以作為輔助檢查,CT
檢查往往需要增強(qiáng)掃描。至于如何選擇MRI 檢查參數(shù)
要根據(jù)檢查設(shè)備和自己經(jīng)驗(yàn)來摸索總結(jié)。
DSA 造影檢查中要注意的幾個(gè)問題:①要注意無
菌操作原則。②手術(shù)要輕柔,忌粗暴,既要充分暴露
腹主動脈,又要盡量減小切口及創(chuàng)面。③選擇性插管
應(yīng)盡可能深地將導(dǎo)管插入腹腔干內(nèi),注射造影劑的壓
力不要太大。
綜上所述,通過對 Wistar 大鼠移植性肝癌的病理
及影像學(xué)綜合分析,本實(shí)驗(yàn)建立的大鼠種植性
CBRH-7919 肝癌模型的影像學(xué)特點(diǎn)及生物學(xué)模式和
臨床較為相似,非常適合影像診斷及介入治療等實(shí)驗(yàn)
研究。
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